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《细胞生物学层次化实验指导》由南京大学多年从事细胞生物学理论与实验教学的教师编写。共收录55个有代表性的细胞生物学实验，依据类型、难度、用时等特点对实验内容进行了归类和编排，分为三章。**章编写了22个基本型实验，涉及细胞的形态、结构观察及组成显示，细胞计数，细胞生理，细胞分裂，细胞裂解及效果检测，细胞器的分离及细胞融合；第二章为21个综合型实验，包括细胞的分离与分选、细胞培养、细胞增殖及细胞活力检测、细胞黏附与迁移分析、细胞的激活及信号转导分子检测、哺乳动物细胞转基因及表达检测、细胞周期调控及检测；第三章为12个开放探索型实验，涉及细胞凋亡及胀亡的诱导及检测、细胞自噬的诱导及检测、细胞衰老的诱导与检测、细胞分化的诱导及检测、小干扰RNA引起的基因沉默、细胞端粒酶活性检测。此外，还有附录介绍常用溶液的配制、腹水瘤小鼠模型的建立和细胞培养前的准备工作，并附《细胞生物学层次化实验指导》部分实验结果彩图。

目录

**章 基本型实验 1

**节 细胞的形态、结构观察及组成显示 1

实验1 血细胞装片及涂片的制备及染色观察 2

实验2 植物细胞的叶绿体、线粒体及液泡观察 6

实验3 蟾蜍胸骨剑突软骨细胞高尔基体的中性红染色 7

实验4 马铃薯和花生徒手切片的制备及细胞内多糖、脂肪的染色 8

实验5 孚尔根法显示细胞中的DNA 10

实验6 甲基绿-派洛宁染色法显示细胞中的DNA和RNA 11

实验7 考马斯亮蓝染色法显示洋葱鳞茎内表皮及巨噬细胞的细胞骨架 13

实验8 酸性磷酸酶法显示巨噬细胞溶酶体 16

实验9 细胞中过氧化物酶体的显示 18

实验10 酶免疫细胞化学法显示人T细胞表面CD3分子 19

实验11 细胞大小的显微测量 21

第二节 细胞计数 23

实验12 细胞计数 23

第三节 细胞生理 25

实验13 哺乳动物红细胞膜的通透性检测 26

实验14 植物细胞质壁分离现象观察及质壁分离法测定基态渗透值 27

实验15 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象观察及吞噬活性检测 29

实验16 台盼蓝染料排除法检测活细胞比率 32

第四节 细胞分裂 33

实验17 压片法制备植物组织细胞分裂标本片及分裂各期细胞特征观察 34

实验18 滴片法制备动物细胞分裂标本片及细胞分裂指数分析 35

第五节 细胞裂解及效果检测 38

实验19 小鼠腹水瘤细胞裂解及乳酸脱氢酶活性检测 39

第六节 细胞器的分离 40

实验20 植物细胞叶绿体的分离 41

实验21 动物细胞线粒体的分离 43

第七节 细胞融合 45

实验22 PEG介导的细胞融合 46

参考及拓展阅读文献 47

第二章 综合型实验 49

**节 细胞的分离与分选 49

实验23 密度梯度离心法分离血液单个核细胞 50

实验24 免疫磁珠分选法分离小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞 52

实验25 T细胞的免疫荧光标记及流式细胞仪分选 54

第二节 细胞培养 56

实验26 贴壁细胞的原代培养 58

实验27 贴壁细胞的传代培养 61

实验28 细胞冻存与解冻复苏 63

实验29 动物外周血细胞培养及染色体制备 66

第三节 细胞增殖及细胞活力检测 68

实验30 MTT比色法检测细胞增殖与活力 68

实验31 CCK-8法检测细胞增殖与活力 70

第四节 细胞黏附与迁移分析 71

实验32 肿瘤细胞黏附能力分析 72

实验33 检测肿瘤细胞侵袭能力的Transwell小室实验 74

实验34 肿瘤细胞迁移的划痕实验（wound scratch assay） 75

第五节 细胞的激活及信号转导分子检测 76

实验35 利用钙离子荧光探针检测细胞内Ca2+浓度 77

实验36 信号蛋白磷酸化水平检测 79

实验37 转录因子NF-κB活性检测 82

第六节 哺乳动物细胞转基因及表达检测 84

实验38 绿色荧光蛋白基因转染体外培养的小鼠成纤维细胞及表达检测 85

第七节 细胞周期调控及检测 87

实验39 利用流式细胞术分析细胞周期时相 88

实验40 细胞周期蛋白D1基因转染细胞及细胞周期检测 91

实验41 胸腺嘧啶脱氧核苷（TdR）双阻断法同步化培养动物细胞 93

实验42 秋水仙胺阻抑法分离贴壁培养的哺乳动物M期细胞 95

实验43 植物细胞中期同步化诱导 97

参考及拓展阅读文献 98

第三章 开放探索型实验 102

**节 细胞凋亡及胀亡的诱导及检测 102

实验44 凋亡细胞及胀亡细胞的形态学检测 102

实验45 AnnexinV-FITC/PI双染色法检测凋亡与胀亡细胞 104

实验46 凋亡细胞DNA的电泳检测 107

实验47 TUNEL技术原位检测凋亡细胞DNA断裂 110

第二节 细胞自噬的诱导及检测 113

实验48 MDC染色法检测巨噬细胞自噬现象 114

实验49 GFP-LC3基因转染法显示自噬体 115

第三节 细胞衰老的诱导与检测 117

实验50 细胞ROS的流式细胞仪检测 118

实验51 H2O2诱导细胞衰老及胞内衰老相关的β-半乳糖苷酶检测 120

第四节 细胞分化的诱导及检测 123

实验52 骨髓造血干细胞的诱导分化 124

实验53 视黄酸诱导肿瘤细胞分化及检测 128

第五节 小干扰RNA引起的基因沉默 130

实验54 RNA干扰沉默绿色荧光蛋白基因 130

第六节 细胞端粒酶活性检测 133

实验55 肿瘤细胞的端粒酶活性检测 133

参考及拓展阅读文献 136

附录一 本书常用溶液配制方法 139

附录二 腹水瘤小鼠模型建立方法 141

附录三 细胞培养前的准备工作 142

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